Главная » Операции, процедуры, тесты, Полный перечень статей » Что такое ПЦР (полимеразная цепная реакция)?
ПЦР или полимеразная цепная реакция представляет собой процедуру, лабораторную процедуру, при которой производятся миллионы экземпляров определенного участка ДНК. По существу, этот способ амплификации можно проводить с мельчайшими количествами ДНК, которые могут присутствовать в крови, волосах или в тканях, таким образом, они могут быть скопированы так , чтобы их было достаточно для анализа. Название этого метода происходит от ключевого компонента, который осуществляющет репликацию ДНК – ДНК-полимераза. Наиболее часто используемой полимеразой является Taq -полимераза, которая выделяется из бактерии Thermus. Этот фермент работает примерно при 70 градусах. Полимераза может создать новую цепь ДНК, с использованием оригинальных ДНК в качестве матрицы и с использованием олигонуклеотидов ДНК (также известные как праймеры). Праймеры, используемые в ПЦР – это короткие последовательности ДНК, которые необходимы для инициации процесса копирования. Сегодня, ПЦР может быть проведена в течение нескольких часов, что делает ее очень быстрым анализом. Скорость теста очень часто требуется в диагностической обстановке, когда срочные результаты необходимы для врача, ПЦР, как правило, выполняется в специальных медицинских лабораториях – медицинские лаборатории в Киеве. Методы и сферы применения постоянно растут, этот метод широко распространен во многих научных дисциплинах, в том числе в молекулярной биологии, микробиологии, генетике, в клинической диагностике, судебной медицине, экологии и т.п.
Сегодня исследователями и клиницистами применяется три основных шага, участвующих в выполнении ПЦР. Эти этапы повторяют 30-40 раз в виде циклов нагрева и охлаждения, при этом, каждый шаг происходит при другой температуре. Компоненты, необходимые для проведения ПЦР.
- Матричная ДНК: ДНК которые должны быть скопированы, как правило, экстрагируют и очищают из крови или другой ткани.
- Одноцепочечные олигонуклеотиды, которые соответствуют именно началу и концу ДНК-матрицы. Они генерируются синтетически.
- ДНК-полимераза (например, Taq-полимераза). Она необходима для синтеза ДНК.
- дНТФ (дезоксирибонуклеотидтрифосфаты): строительные блоки, из которых полимераза Taq может синтезировать новую ДНК. Они добавляются в избыточном количестве.
- Буферный раствор. Создает оптимальные условия для протекания реакции
- Раствор хлорида магния
Вариации ПЦР
Существуют несколько вариантов метода ПЦР. Один широко используемый метод особенно важен – это ПЦР в реальном времени или количественныйй ПЦР. ПЦР в реальном времени может быть использован для подсчета количества ДНК, или числа копий гена, которые присутствуют в образце. Этот метод используется для определения вирусной нагрузки ВИЧ у больных СПИДом, а также используется в диагностике рака для подсчета количества раковых клеток, оставшихся у пациента, подвергаемого лечению.
Ещё новости: